引物二聚体是PCR反应中常见的问题之一,它是指在PCR反应中引物之间相互结合,而不是与模板DNA配对,从而导致产物的合成受到影响。
研究表明,引物二聚体的形成与引物浓度、引物序列、PCR反应条件等因素有关。常见的解决方式包括:
- 调整引物浓度:建议引物浓度不超过200nM,如果需用高浓度引物,可以将引物储存温度降至-20℃或更低避免二聚体的形成。
- 改变引物序列:设计引物时避免引物序列中出现三个以上连续相同核苷酸。
- 调整PCR反应条件:包括改变反应体系、循环条件等。
引物二聚体会影响PCR反应的特异性和灵敏性,因此必须认真对待。在实验中遇到问题时,应该及时排除引物二聚体的可能性,并选择合适的解决方式。